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支原體檢測

產(chǎn)品簡介

支原體檢測屬于監(jiān)管要求的一部分,方法在全球范圍內(nèi)的一些藥典、法規(guī)和指導(dǎo)文件中均有說明。支原體污染檢測必須在產(chǎn)品開發(fā)的各個階段進行,包括原材料、細(xì)胞庫(MCB+WCB+EOPC)、病毒種子庫、未加工的收獲液材料和最終產(chǎn)品。

更新時間:2024-12-07
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支原體簡介
     支原體(Mycoplasma),是大小介于細(xì)菌和病毒之間的一類無細(xì)胞壁的原核細(xì)胞微生物,他們是已知最小的自我復(fù)制的原核生物。支原體細(xì)胞能夠透過一般濾膜(0.22μm),且形態(tài)存在差異,呈高度多形性,有球形、桿狀、絲狀、分枝狀等多種。不能被革蘭氏染色,但可在瓊脂固體平板上形成“菌落"且可被甲基藍(lán)染色。

     支原體以寄生和共生方式存活,部分可能導(dǎo)致動物、植物宿主的病變。對人致病的支原體主要有肺炎支原體、溶脲脲原體、人型支原體、生殖器支原體等。支原體是細(xì)胞污染物中比較常見的一種,細(xì)胞受支原體污染程度較輕時,不會表現(xiàn)出明顯的癥狀,但一旦這種潛伏的污染爆發(fā)時,細(xì)胞會大量脫落,細(xì)胞培養(yǎng)液會變渾濁。原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞都可能遭受支原體污染,根據(jù)不同實驗室的調(diào)查結(jié)果顯示,有15%-80%的細(xì)胞被支原體污染,傳代細(xì)胞的污染率高于原代細(xì)胞。
     盡管自然界中存在的支原體有120多種,但污染細(xì)胞的支原體主要有5種分別為:萊氏無膽甾原體、精氨suan支原體、口腔支原體、發(fā)酵支原體和豬鼻支原體,這5 種支原體占所有支原體污染的95%以上。支原體污染可能來自操作人員和細(xì)胞培養(yǎng)用原材料如血清和yi蛋白酶,也可能來自于本身已被污染的細(xì)胞系和毒種。細(xì)胞受支原體污染后,功能和活性都會受到影響,會帶來不可靠的實驗結(jié)果和不安全的細(xì)胞制品。因此,對細(xì)胞進行支原體檢測十分關(guān)鍵。

要求

    支原體檢測屬于監(jiān)管要求的一部分,方法在全球范圍內(nèi)的一些藥典、法規(guī)和指導(dǎo)文件中均有說明。針對生物制藥產(chǎn)品檢測檢測指導(dǎo)方針包括以下內(nèi)容:

•中國藥典2020版三部:3301 支原體檢查法
•歐洲藥典 2.6.7:Mycoplasmas
•美國藥典<63>:Mycoplasma Tests
•日本藥典18th版: Mycoplasma Testing for Cell Substrates used for
the Production of Biotechnological/Biological Products.


     必須證明用于生物制品生產(chǎn)的細(xì)胞基質(zhì)不含外源因子,包括支原體。支
原體污染檢測必須在產(chǎn)品開發(fā)的各個階段進行,包括原材料、細(xì)胞庫(MCB+WCB+EOPC)、病毒種子庫、未加工的收獲液材料和最終產(chǎn)品。


檢測方法

qPCR法是通過特異性的引物和熒光探針結(jié)合支原體靶基因,通過聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴增釋放熒光基團并放大熒光信號的方式檢測待測樣本中是否含有支原體污染。 被污染的樣本將出現(xiàn)S型擴增曲線。 PCR反應(yīng)時間通常需要1-2小時。
Mycoplasma
Detection
培養(yǎng)法
指示細(xì)胞法
qPCR法
    培養(yǎng)法是通過將待檢測樣本直接接種到適用于支原體生長的瓊脂培養(yǎng)基中培養(yǎng),并通過顯微鏡檢查支原體菌落來檢測樣品中是否存在支原體污染。培養(yǎng)法檢測時間通常為28天。
    指示細(xì)胞法是使用Vero或NIH3T3細(xì)胞孵育支原體一周后,使用DNA結(jié)合熒光染料染色。在熒光顯微鏡下觀察待測樣本是否存在支原體污染。被污染的樣品指示細(xì)胞表面和周圍會出現(xiàn)明亮的熒光。

qPCR檢測試劑盒

Mycoplasma
qPCR Kit
        LPM MycProbe支原體Real-Time PCR試劑盒是基于LPM(Lux Preserve Matrix)高靈敏熒光探針法自主研發(fā)的創(chuàng)新產(chǎn)品,能夠?qū)Χ喾N支原體進行快速、可靠檢測。 滿足《歐洲藥典》第2.6.7章的相關(guān)要
求,能夠高度特異性檢測肺炎支原體、口腔支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體等《歐洲藥典》和《日本藥典》規(guī)定的支原體亞型,檢測數(shù)據(jù)可靠,檢測靈敏度可達10 CFU/mL。

支原體檢測


產(chǎn)品組成

支原體檢測

特點

支原體檢測

產(chǎn)品表現(xiàn)

支原體檢測

康妍葆 MycProbe ?原體 Real-Time PCR 檢測試劑盒(100 Reactions)
產(chǎn)品?錄號: KYB-Q-001-C
產(chǎn)品描述:
MycProbe 支原體 Real-Time PCR 試劑盒是基于 LPM 高靈敏熒光探針法自主研發(fā)的創(chuàng)新產(chǎn)品,能夠?qū)Χ喾N支原體進行快速、可靠檢測。經(jīng)驗證滿足《歐洲藥典》第 2.6.7 章的相關(guān)要求,能夠高度特異性檢測肺炎支原體、口腔支原體、豬鼻支原體、發(fā)酵支原體等《歐洲藥典》和《日本藥典》規(guī)定的支原體亞型,檢測數(shù)據(jù)可靠,經(jīng)驗證對常見細(xì)菌和真菌不產(chǎn)生交叉反應(yīng),檢測靈敏度可達 10 CFU/mL。
產(chǎn)品組成:

支原體檢測

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支原體檢測

支原體檢測

支原體檢測

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