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使用BEX電轉(zhuǎn)儀,這些知識(shí)點(diǎn)你得知道!

更新時(shí)間:2021-12-03點(diǎn)擊次數(shù):1947
  在生物醫(yī)學(xué)和生物技術(shù)研究領(lǐng)域里,研究者經(jīng)常需要把DNA、RNA、siRNA、多肽、蛋白質(zhì)、抗體、藥物以及其他物質(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞里,用于研究它們的生物功能。BEX電轉(zhuǎn)儀可高效地將核酸導(dǎo)入所有測(cè)試過的哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型中,包括難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞和干細(xì)胞等,具有相當(dāng)出色的轉(zhuǎn)染效率和極低的死亡率。
  
  電轉(zhuǎn)染過程中,細(xì)胞懸浮在可以保護(hù)細(xì)胞的緩沖液中,需要被導(dǎo)入細(xì)胞的物質(zhì)被混合在緩沖液中,然后細(xì)胞樣品加入電擊管。將電擊管插入適配器的孔中,關(guān)上翻蓋將電擊管接入電路。接著在屏幕上的控制界面完成參數(shù)設(shè)置,隨后開始電轉(zhuǎn),電脈沖將流過細(xì)胞樣品。完成電轉(zhuǎn)后,屏幕上會(huì)出現(xiàn)一個(gè)波形圖,此時(shí)電轉(zhuǎn)已經(jīng)完成,可以將電擊管取出。
  
  對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,電轉(zhuǎn)時(shí)細(xì)胞密度需要至少10M/ml,推薦細(xì)胞密度在20M‐50M/ml。細(xì)胞密度越高可以增加細(xì)胞間電流輔助,從而增加細(xì)胞的有效電轉(zhuǎn)面積。
  
  需要特別注意的地方:一個(gè)樣品加進(jìn)電擊管后,不要等候,馬上進(jìn)行電轉(zhuǎn),完成后再處理下一個(gè)樣品,不要把一批樣品全部加樣完成后再一起電轉(zhuǎn)。
  
  等候時(shí)間過長(zhǎng),細(xì)胞沉降也會(huì)導(dǎo)致電擊管內(nèi)上下細(xì)胞密度不均勻而降低電轉(zhuǎn)效率。電轉(zhuǎn)完成后細(xì)胞可以馬上取出培養(yǎng),也可以等全部樣品處理完畢再取出培養(yǎng)。
  
  當(dāng)細(xì)胞聚團(tuán)時(shí),其中只有一側(cè)細(xì)胞可以被電轉(zhuǎn),中間和另一側(cè)細(xì)胞不能被電轉(zhuǎn),降低BEX電轉(zhuǎn)儀的效率。所以消化細(xì)胞過程中注意細(xì)胞不要成團(tuán)。

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