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酵母互補(bǔ)實驗的快速檢測方法

更新時間:2021-10-21點擊次數(shù):2311

 酵母,一種體內(nèi)模式生物,具有很大的優(yōu)勢。釀酒酵母,芽殖酵母,是一種單細(xì)胞真核生物。大多數(shù)進(jìn)程,例如轉(zhuǎn)錄,翻譯,蛋白質(zhì)折疊都是保守的,因此酵母是一種非常合適的復(fù)雜哺乳動物細(xì)胞的替代品。

 

與其他模式生物不同,例如大腸桿菌,酵母沒有毒性,而且能表達(dá)完整的膜蛋白。

 

1996年對酵母基因組進(jìn)行測序后,出現(xiàn)了許多用于基因操作的工具。發(fā)明了例如穿梭載體,通過同源重組刪除基因。可以使用具有缺失菌株的大型文庫,輕松設(shè)置功能分析。

 

酵母互補(bǔ)試驗,缺失某種蛋白質(zhì)的酵母突變體,通過轉(zhuǎn)基因?qū)⒁粋€外顯子基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)入突變體。此時,這株酵母突變體面對一種境況,就是這種缺失掉的蛋白質(zhì)功能會影響它的存活和生長。如果這種缺失型突變體生長出來了,就意味著這種轉(zhuǎn)入的外顯子基因補(bǔ)償了這種缺失基因的功能,使得酵母細(xì)胞能夠正常存活和生長。有一些方法可以檢測酵母的互補(bǔ)試驗,比如液體測量,尿素測量法,氨測量法,水份測量法等。在此,我們介紹一種方法:計數(shù)酵母的方法。

 

CellDrop 明場計數(shù)酵母細(xì)胞:采用*的小細(xì)胞模式,結(jié)合AI算法,準(zhǔn)確計算酵母細(xì)胞總數(shù)

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不僅如此,采用熒光染料FDA+PI的組合,可以進(jìn)行酵母細(xì)胞的活力檢測

 活性檢測:

     活性檢測即用兩種不同的熒光試劑進(jìn)行染色。Y20.1細(xì)胞,過夜誘導(dǎo),在明場計數(shù)儀下計數(shù)5e6 cells/ml. 針對CellDrop 酵母活性分析(DeNovix18ul的細(xì)胞懸浮液和1ulFDAPI?;旌衔锉芄庀?/span>15min10ul的混合物側(cè)面peptide入到celldrop中,進(jìn)入yeast app進(jìn)行測量。

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   活力檢測中,應(yīng)用熒光試劑判斷酵母細(xì)胞的死活,將檢測時間從5天的尿素檢測或氨檢測時間縮短到了十幾秒。

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    無需一次性或可重復(fù)利用的計數(shù)板,CellDrop BF/FL做到絕對的無耗材,是新一代計數(shù)儀的代表。


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